Mindenki tudja, hogy sok laboratórium van, tehát hányan ismerik a PCR-laborokat? És mik az alapvető követelmények a PCR laborok tervezésénél? Aztán lesz VOLAB Xiaobian, hogy megbeszéljük mindenkivel~
1, PCR laboratórium elrendezése
A PCR amplifikációs tesztlaboratórium elvileg négy külön munkaterületre oszlik: reagens tárolási és előkészítési területre, minta előkészítési területre, amplifikációs reakciókeverék előkészítési és amplifikációs területre, valamint amplifikációs termék elemzési területre. A keresztszennyeződés elkerülése érdekében minden munkaterületre szigorúan egyetlen irányt kell követni, vagyis csak a reagens tárolási és előkészítési területéről → minta előkészítési területről → amplifikációs reakciókeverék előkészítési és amplifikációs területéről → amplifikációs termék elemzési területéről. Az egyes kísérleti zónák közötti reagens- és mintaátvitelt egy átviteli ablakon keresztül kell végrehajtani.
2. Laboratóriumi klíma szellőzőrendszer tervezése és nyomásszabályozása
A PCR-laboratóriumoknak nincsenek szigorú tisztítási követelményei, de a különböző kísérleti területek közötti kereszt-szennyeződés elkerülése érdekében célszerű teljes-áramú levegőelosztó rendszert alkalmazni. Ugyanakkor szigorúan ellenőrizni kell a küldés és a kimerítés arányát az egyes kísérleti területek nyomásigényének biztosítása érdekében.
2.1, minta előkészítési terület
A fő műveletek ezen a területen a minták tartósítása, nukleinsavak (RNS, DNS) kinyerése, tárolása és amplifikációs reakciócsövekbe adása, valamint a DNS szintézis meghatározása. A nyomásgradiens követelményei ezen a területen a következők: pozitív nyomás a szomszédos területhez képest, hogy elkerüljük az aeroszolos szennyeződést a szomszédos területről ebbe a területbe. Ezen túlmenően, mivel a rakodási művelet során előfordulhat aeroszol{2}}szennyeződés, kerülni kell a felesleges gyaloglást a területen.
2.2. Reagens tárolási és előkészítési terület
Ezen a kísérleti területen a fő műveletek a tárolóreagensek elkészítése, a reagensek adagolása és a fő reakcióelegyek elkészítése. A minta-előkészítéshez használt reagenseket és anyagokat közvetlenül erre a területre kell szállítani, és nem szabad áthaladniuk más területeken. A reagens nyersanyagokat ezen a területen kell tárolni, és a területen a szükséges tárolóreagensekké kell előkészíteni. A légnyomás szabályozására nincsenek szigorú követelmények.
2.3, amplifikációs termék elemzési terület
A fő művelet ezen a területen az amplifikált fragmensek meghatározása. Ez a terület az amplifikált termék szennyeződésének fő forrása. Ezért a nyomásgradiens követelményei erre a területre a következők: Negatív nyomás a szomszédos területhez képest, hogy elkerüljük az amplifikált termékek diffúzióját a területről más területekre.
2.4, amplifikációs reakcióelegy előkészítése és amplifikációs zóna
A fő művelet ezen a területen a DNS-amplifikáció. Ezenkívül ezen a területen az elkészített DNS-templát (a minta-előkészítési területről) és a fő reakcióelegy (a reagenstároló és -előkészítési területről) hozzáadása reakcióelegy elkészítéséhez stb. A nyomásgradiens követelményei ezen a területen a következők: negatív nyomás a szomszédos területhez képest, hogy elkerüljük az aeroszol szivárgását a területről. Az aeroszolok okozta szennyezés elkerülése érdekében minimalizálni kell a felesleges gyaloglást a területen. Az egyes műveleteket, például a mintavételt, a tiszta padon kell elvégezni.
3.1. A munkaterület szigorú felosztása
(1) Az egyes kísérleti területek beállítása ésszerű;
(2) Minden kísérleti területen egyértelmű jeleket kell elhelyezni (például feltűnő házszámokat vagy eltérő alapszíneket stb.), hogy elkerüljük a különböző kísérleti területeken lévő berendezések és reagensek összetévesztését.
3.2, ésszerű rendszerbeállítások
(1) A légkondicionáló szellőzőrendszer ésszerű beállítása, próbálja meg a teljes -send légkondicionálás-rendszert használni;
(2) A szigorú légáramlási nyomásszabályozás különböző nyomásigényeket biztosít a különböző kísérleti területeken.
3.3, a szabványos működés
(1) Az amplifikációvizsgáló laboratórium technikusainak -a munkaköri képzésen kell részt venniük-, és csak a képzés sikeres elvégzése után vehetnek részt klinikai génamplifikációs tesztekben;
(2) A kísérleti művelet során a kezelőnek kesztyűt kell viselnie, és azt gyakran cserélnie kell. Ezen túlmenően az eldobható kupak használata a működés során szintén hatékony intézkedés a szennyeződés megelőzésére;
(3) A takarítási munka időben és megfelelően történik. A kísérlet befejezése után a területet azonnal meg kell tisztítani. A felületek fertőtlenítésére vagy az ultraibolya lámpák besugárzására és fertőtlenítésére szolgáló hagyományos fertőtlenítő folyadékok mellett egyes kísérleti berendezéseket is nagynyomású sterilizálásnak kell alávetni.
3.4, szigorú irányítás
(1) Szigorúan ellenőrizni kell a laboratóriumba belépő és onnan távozó személyzetet. A kísérlethez nem kapcsolódó személyek tetszés szerint nem léphetnek be és nem hagyhatják el a laboratóriumot, szükség esetén önálló átjárókat és ajtókat kell kialakítaniuk a teljes kísérleti területre és onnan kifelé.
(2) Minimalizálja a szükségtelen gyaloglást a kísérleti területen, hogy csökkentse a keresztszennyeződés lehetőségét.
(3) Az amplifikált termék vizsgálati területe az amplifikált termék legfontosabb szennyeződési forrása. A hulladékoldatot nem lehet a laboratóriumban lerakni. A fertőtlenítő oldatba kell áztatni, majd a laboratóriumtól távolabbi helyen el kell dobni. A használt hegyek eldobhatóak. Az anyagokat szintén fertőtleníteni és sterilizálni kell, majd egyenletesen kell kezelni, például elégetni;
(4) Az amplifikációs termékelemzési terület egyes génmutációkat és toxikus anyagokat alkalmazhat, ezért kiemelt figyelmet kell fordítani a kísérletvezető biztonságának védelmére.
3.5. Komplett laboratóriumi felszereltség
A kísérleti munka biztosításának elengedhetetlen feltétele a komplett laboratóriumi felszerelés. A megfelelő berendezéseket és műszereket az egyes laboratóriumok különböző kísérleti tartalmának megfelelően kell felszerelni, például ultra-tiszta padokat, centrifugákat és mintaadagolókat.